基于自主研发的π-FISH rainbow技术，鲲羽生物推出了自主品牌的RNA FISH探针试剂盒，并已广泛推广和应用，也收到了很多客户的使用反馈。目前推出的RNA FISH试剂盒版本主要基于荧光直标的方式进行检测，在操作流程与信号定量上更加友好，但在针对低表达以及短片段靶标的情况下兼容性不佳。鲲羽生物秉承持续创新，解决不同需求的理念，现推出化学显色方案版本的RNA FISH试剂盒，以更高的放大倍数，兼容特定检测需求。

在原来π字形探针和U型放大系统的基础之上，使用HRP（辣根过氧化物酶）修饰的探针来代替荧光标记的探针，前者能够活化TSA（酪胺）结合的荧光素底物，使得活化的荧光素在探针结合的位置沉淀，形成稳定的荧光信号。相对于荧光直标方式，化学显色信号更强，不过在检测表达丰度较高的基因时易形成信号重叠以及片状信号。

图源鲲羽生物

针对同一基因RNA靶标，同时进行两种方式检测。左图为荧光直标方式检测结果，信号呈现均一点状分布；右图为化学显色方式检测结果，因其经过化学级联反应，信号亮度更强，部分呈现片状分布。此结果为同一批测试片同一曝光强度下显微成像图片。

小鼠大脑冰冻切片的三基因多重检测结果

基于HRP-TSA化学反应在进行多靶标检测时候，由于都是通过HRP与TSA进行反应，所以需要在每一轮靶标进行反应显色之后，对上一轮探针上的HRP进行封闭，以避免影响下一轮信号。针对此问题我们也进行了测试与流程优化，可以实现基于HRP-TSA化学反应方式的多重检测，满足更加复杂的检测需求。

小鼠脑核内miRNA的检测结果

凭借四级分支放大与化学级联反应形成更高的放大倍数，化学显色方式对于短片段mRNA也能取得较好的检测效果，甚至针对miRNA（~22bp）只通过一组探针就可以实现有效检测，使得该方案可以兼容更多特殊的靶标类型。

目前鲲羽生物π-FISH rainbow RNA FISH试剂盒已经包括荧光直标与化学放大两个版本：

√常规检测、多标共检，推荐荧光直标版本，信号定量更加精准，操作更加简单。

√低表达基因、短片段基因、miRNA等特殊需求，推荐化学放大版本，信号效果更佳。

后续鲲羽生物π-FISH rainbow RNA FISH试剂盒还会继续升级，推出明场版本，以适用临床检测以及自发荧光严重的样品类型，敬请期待。